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        儀器分析——層析技術(shù)一、層析技術(shù)的原理和分類

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        (一)層析技術(shù)的原理
            層析法是目前廣泛應(yīng)用的一種分離技術(shù)。本世紀(jì)初俄國植物學(xué)家M.Tswett發(fā)現(xiàn)并使用這一技術(shù)證明了植物的葉子中不僅有葉綠素還含有其它色素?,F(xiàn)在層析法已成為生物化學(xué)、分子生物學(xué)及其它學(xué)科領(lǐng)域有效的分離分析工具之一。
            層析法是利用不同物質(zhì)理化性質(zhì)的差異而建立起來的技術(shù)。所有的層析系統(tǒng)都由兩個(gè)相組成:一是固定相,它或者是固體物質(zhì)或者是固定于固體物質(zhì)上的成分;另一是流動(dòng)相,即可以流動(dòng)的物質(zhì),如水和各種溶媒。當(dāng)待分離的混合物隨溶媒(流動(dòng)相)通過固定相時(shí),由于各組份的理化性質(zhì)存在差異,與兩相發(fā)生相互作用(吸附、溶解、結(jié)合等)的能力不同,在兩相中的分配(含量對比)不同,而且隨溶媒向前移動(dòng),各組份不斷地在兩相中進(jìn)行再分配。與固定相相互作用力越弱的組份,隨流動(dòng)相移動(dòng)時(shí)受到的阻滯作用小,向前移動(dòng)的速度快。反之,與固定相相互作用越強(qiáng)的組份,向前移動(dòng)速度越慢。分部收集流出液,可得到樣品中所含的各單一組份,從而達(dá)到將各組份分離的目的。
            (二)層析法分類見表
            (三)層析法的特點(diǎn)與應(yīng)用
            表 按兩相所處狀態(tài)分類
             流動(dòng)相
            液體 氣體
             液體 液-液層析法 氣-液層析法
            固定相  
             固體 液-固層析法 氣-固層析法
            層析法是根據(jù)物質(zhì)的理化性質(zhì)不同而建立的分離分析方法。根據(jù)層析峰的位置及峰高或峰面積,可以定性及定量。層析法與光學(xué)、電學(xué)或電化學(xué)儀器連用,可檢測 出層析后各組份的濃度或質(zhì)量,同時(shí)繪出層析圖。層析儀與電子計(jì)算機(jī)聯(lián)用,可使操作及數(shù)據(jù)處理自動(dòng)化,大大縮短分析時(shí)間。由于層析法具有分辨率高、靈敏度 高、選擇性好、速度快等特點(diǎn),因此適用于雜質(zhì)多、含量少的復(fù)雜樣品分析,尤其適用于生物樣品的分離分析。近年來,已成為生物化學(xué)及分子生物學(xué)常用的分析方 法。在醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境化學(xué)、高分子材料、石油化工等方面也得到了廣泛的應(yīng)用。
            表 按層析原理分類
            名稱   分離原理
            吸附層析法 組份在吸附劑表面吸附固定相是固體吸附劑,各能力不同
            分配層析法 各組份在流動(dòng)相和靜止液相(固相)中的分配系數(shù)不同
            離子交換層析法 固定相是離子交換劑,各組份與離子交換劑親和力不同
            凝膠層析法 固定相是多孔凝膠,各組份的分子大小不同,因而在凝膠上受阻滯的程度不同
            親和層析法 固定相只能與一種待分離組份專一結(jié)合,以此和無親和力的其它組份分離
            表 按操作形式不同分類
            名稱 操作形式
            柱層析法 固定相裝于柱內(nèi),使樣品沿著一個(gè)方向前移而達(dá)分離
            薄層層析法 將適當(dāng)粘度的固定相均勻涂鋪在薄板上,點(diǎn)樣后用流動(dòng)相展開,使各組份分離
            紙層析法 用濾紙作液體的載體,點(diǎn)樣后用流動(dòng)相展開,使各組份分離
            薄膜層析法 將適當(dāng)?shù)母叻肿佑袡C(jī)吸附劑制成薄膜,以類似紙層析方法進(jìn)行物質(zhì)的分離