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        執(zhí)業(yè)中藥師專業(yè)知識二中藥鑒定輔導:黃酮類化合物的提取分離

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        一、提取
            黃酮苷和極性較大的苷元:甲醇,乙醇,甲醇-水(1:1),丙酮,乙酸乙酯。
            多糖苷:沸水
            花色苷:0.1%鹽酸進行提取。
            苷元:氯仿,乙醚,乙酸乙酯。
            注意:苷類提取防止酶解。
            (一)溶劑萃取法:自浸膏中先用乙醚萃取苷元,再用乙酸乙酯反復萃取苷,最后用正丁醇萃取極性較大的苷。
            (二)堿提酸沉法
            (1) 常用堿水:石灰水,Na2CO3,稀NaOH,堿性稀醇。
            酸沉:鹽酸
            注意:酸堿濃度不宜過高。
            堿性過強,破壞黃酮母核;酸性過強,生成佯鹽,影響產率。
            石灰水:可除去鞣質,果膠,粘液質,有利于純化。但浸出效果不及NaOH ,且有些黃酮可與鈣結合成不溶性沉淀。 稀NaOH:浸出效率高,但雜質多。
            二、分離方法
            分離的基本依據:
            極性差異、酸性強弱、分子大小和特殊結構。
            (一)柱色譜法
            1、硅膠柱色譜法
            適于分離異黃酮,二氫黃酮(醇)和高度甲基化或乙?;狞S酮及黃酮醇類。
            分離苷元時:氯仿-甲醇混合溶劑洗脫。
            分離苷時:氯仿-甲醇-水或乙酸乙酯-丙酮-水
            2、聚酰胺柱色譜
            適于黃酮類化合物的分離。
            規(guī)律:
            A:苷元相同時,以含水移動相洗脫,被吸附的強弱順序為: 苷元>單糖苷>雙糖苷>雙糖鍵苷。
            B:與酚羥基的數(shù)目有關,數(shù)目越多,吸附力越強。與酚羥基的位置有關,如果酚羥基所處的位置易形成分子內氫鍵,則吸附力減弱。
            查耳酮>二氫黃酮, 黃酮>二氫黃酮
            C:不同類型黃酮類化合物,被吸附的強弱順序為:黃酮醇>黃酮>二氫黃酮>異黃酮。
            D:分子內芳香化程度越高,共軛雙鍵越多,則吸附力越強。
            3、葡聚糖凝膠色譜法
            凝膠類型:Ssephadex LH-20和Sephadex G兩種類型的凝膠。
            分離苷元時:利用吸附作用,游離酚羥基數(shù)目越多,則吸附力越強,越難洗脫。
            分離苷時:主要靠分子篩,洗脫時按苷分子量由大到小的順序依次被洗脫出柱體。
            黃酮類化合物 取代基 Ve/Vo
            芹菜素 5,7,4‘-三羥基 5.3
            木犀草素 5,7,3‘,4’-四羥基 6.3
            槲皮素 3,5,7,3',4'-五羥基 8.3
            楊梅素 3,5,7,3‘,4’,5‘-六羥基 9.2
            山柰酚-3-鼠李糖基 三糖苷 3.3
            半乳糖-7-鼠李糖苷
            槲皮素-3-蕓香糖苷 雙糖苷 4.0
            槲皮素-3-鼠李糖苷 單糖苷 4.9
            常用的洗脫劑:堿性水溶液,含鹽水溶液、醇及含水醇
            (二)PH梯度法:用不同濃度的堿分離
            (三)硼酸絡合法 具有鄰二酚羥基的黃酮類化合物可與硼酸絡合生成易溶于 水的化合物。