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        傳染病學(xué)指導(dǎo):淋球菌連接酶鏈反應(yīng)(LCP)檢測(cè)方法

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        目前PCR檢測(cè)淋球菌的方法被廣泛地使用。其特異性,靈敏性不斷提高。同時(shí)另一種基因診斷技術(shù)——連接酶鏈反應(yīng)(LCP)也以其高特異,高靈敏性被應(yīng)用于淋球菌的檢測(cè)中。LCP與PCR不同之處在于LCP用四對(duì)引物,所用酶是連接酶。連接酶可以將兩條相鄰引物連接起來(lái)。連接起來(lái)的兩條引物可以作為另兩條引物的模板,后者在連接酶作用下連接,又可作為模板,如此進(jìn)行30~40次循環(huán)。LCP所用的模板處理方法與PCR模板制備相等。LCP所用的探針除了可以設(shè)計(jì)在CPPB基因上,也可以設(shè)計(jì)在染色體基因序列上,例如opa-1基因。美國(guó)Abbott實(shí)驗(yàn)室在opa-1基因的48bp長(zhǎng)的區(qū)域內(nèi)設(shè)計(jì)了4個(gè)LCP探針,由于opa-1基因在淋球菌的染色體中有11次重復(fù)。因此,該組LCP探針具有高靈敏性和特異性。LCP反應(yīng)過(guò)程:
            將模板加入LCP反應(yīng)液中,100μl反應(yīng)產(chǎn)物加入酶標(biāo)板微孔中,進(jìn)行顯色反應(yīng),最后用酶標(biāo)儀讀取光值。根據(jù)Buimer的實(shí)驗(yàn)證明,LCP在檢測(cè)男性尿道棉拭子標(biāo)本的靈敏度為100%,尿液標(biāo)本為88.9%,女性宮頸棉拭子標(biāo)本為95.4%.LCP方法的特異性高達(dá)100%,這一點(diǎn)明顯高于PCR的特異性,避免了假陽(yáng)性的發(fā)生。