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蛋白質(zhì)分離純化的方法主要有:鹽析、透析、超離心、電泳、離子交換層析、分子篩層析等方法。
1.鹽析是應(yīng)用中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液,使蛋白聚集而沉淀。
2.透析方法是利用僅能通透小分子化合物的半透膜,使大分子蛋白質(zhì)和小分子化合物分離,達(dá)到濃縮蛋白質(zhì)或去除鹽類小分子的目的。
3.超離心蛋白質(zhì)為膠體顆粒,在離心力作用下,可沉降。由于蛋白質(zhì)其密度與形態(tài)各不相同,可以應(yīng)用超離心法將各種不同密度的蛋白質(zhì)加以分離。
4.電泳蛋白質(zhì)在一定的pH溶液中可帶有電荷,成為帶電顆粒,在電場中向相反的電極方向泳動(dòng)。由于蛋白質(zhì)的分子量和電荷量不同,其在電場中的泳動(dòng)速率也不同,從而將蛋白質(zhì)分離成泳動(dòng)速率快慢不等的條帶。
5.離子交換層析蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì),在一定的pH溶液中,可解離成帶電荷的膠體顆粒,可與層析柱內(nèi)離子交換樹脂顆粒表面的相反電荷相吸引,然后用鹽溶液洗脫,帶電量小的蛋白質(zhì)先被洗脫,隨著鹽濃度增加,帶電量多的也被洗脫,分部收集洗脫的蛋白質(zhì)溶液,達(dá)到分離蛋白質(zhì)的目的。
6.分子篩是根據(jù)蛋白質(zhì)顆粒大小而進(jìn)行分離的一種方法。層析柱內(nèi)填充著帶有小孔的顆粒,小分子蛋白質(zhì)進(jìn)入顆粒,而大分子蛋白則不能,因此不同大小的蛋白質(zhì)在層析柱內(nèi)的滯留時(shí)間不同,流出層析柱的先后不同,可將蛋白質(zhì)按分子大小而分離。
蛋白質(zhì)分離純化的方法主要有:鹽析、透析、超離心、電泳、離子交換層析、分子篩層析等方法。
1.鹽析是應(yīng)用中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液,使蛋白聚集而沉淀。
2.透析方法是利用僅能通透小分子化合物的半透膜,使大分子蛋白質(zhì)和小分子化合物分離,達(dá)到濃縮蛋白質(zhì)或去除鹽類小分子的目的。
3.超離心蛋白質(zhì)為膠體顆粒,在離心力作用下,可沉降。由于蛋白質(zhì)其密度與形態(tài)各不相同,可以應(yīng)用超離心法將各種不同密度的蛋白質(zhì)加以分離。
4.電泳蛋白質(zhì)在一定的pH溶液中可帶有電荷,成為帶電顆粒,在電場中向相反的電極方向泳動(dòng)。由于蛋白質(zhì)的分子量和電荷量不同,其在電場中的泳動(dòng)速率也不同,從而將蛋白質(zhì)分離成泳動(dòng)速率快慢不等的條帶。
5.離子交換層析蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì),在一定的pH溶液中,可解離成帶電荷的膠體顆粒,可與層析柱內(nèi)離子交換樹脂顆粒表面的相反電荷相吸引,然后用鹽溶液洗脫,帶電量小的蛋白質(zhì)先被洗脫,隨著鹽濃度增加,帶電量多的也被洗脫,分部收集洗脫的蛋白質(zhì)溶液,達(dá)到分離蛋白質(zhì)的目的。
6.分子篩是根據(jù)蛋白質(zhì)顆粒大小而進(jìn)行分離的一種方法。層析柱內(nèi)填充著帶有小孔的顆粒,小分子蛋白質(zhì)進(jìn)入顆粒,而大分子蛋白則不能,因此不同大小的蛋白質(zhì)在層析柱內(nèi)的滯留時(shí)間不同,流出層析柱的先后不同,可將蛋白質(zhì)按分子大小而分離。